粗脂肪定量測(cè)定方法介紹
方法一 抽提法
一、原理：
本法為重量法，用脂肪溶劑將脂肪提出后進(jìn)行稱量，該法適用于固體和液體樣品。通常將樣品浸于脂肪溶劑，為乙醚或沸點(diǎn)30℃至60℃的石油醚，借助于索氏提取器進(jìn)行循環(huán)抽提。用本法提取的脂肪性物質(zhì)為脂肪類物質(zhì)的混合物，其中含有脂肪游離脂肪酸、磷脂\酯、固醇、芳香油某些色素及有機(jī)酸等。因此，稱為粗脂肪。
二、試劑及儀器：
(1)無(wú)水乙醚
(2)海砂
(3)索氏提取器
(4)恒溫水浴鍋
(5)烘箱
(6)脫脂棉花
(7)脫脂濾紙
三、操作步驟
(一)樣品的準(zhǔn)備
稱取樣品的重量根據(jù)材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在10％以下的，稱取樣品10-12克;脂肪含量為50-60％的，則稱取樣品2-4克，(可以用測(cè)定水分后的樣品)。
將樣品在80-100℃烘箱去水分。一般烘4小時(shí)，烘干時(shí)要避免過(guò)熱。冷卻后，準(zhǔn)確地稱取一定量樣品，必要時(shí)，拌以精制海砂，無(wú)損地移入濾紙筒內(nèi)，用脫脂棉塞嚴(yán)，將濾紙筒放人索氏提取器的提取管內(nèi)，注意勿使濾紙筒高于提取管的虹吸部分。
(二)抽取
將洗凈的提取瓶在1.5℃烘箱內(nèi)烘干至恒重,加乙醚約達(dá)到提取瓶容積的1／2-2／3，然后將提取器各部分按圖連接，注意不能漏氣。
加熱提取時(shí)，應(yīng)在電熱恒溫水浴中進(jìn)行(水浴溫度約為40-50℃)也可以使用燈泡或電爐加熱的水浴鍋，嚴(yán)禁用火焰直接加熱索氏提取器。
在加熱時(shí)乙醚蒸發(fā)，乙醚蒸汽由連接管上升至冷凝器，凝結(jié)成液體滴入提取管中，此時(shí)樣品內(nèi)的脂肪為乙醚液面超過(guò)虹吸管高度后溶有脂肪的乙醚虹吸管流入提取瓶，為此循環(huán)抽提，調(diào)解水域溫度，使乙醚每小時(shí)循環(huán)3－5次，提出時(shí)間視樣品的性質(zhì)而定，一般需6－12小時(shí)，樣品含有脂肪是否提取完全，可以用濾紙來(lái)粗略判斷，從提取管內(nèi)吸取少量的乙醚并滴在凈的濾紙上，待乙醚干后，濾紙上不留有油脂的半點(diǎn)則表示已經(jīng)提取完全。
提取完全后，再將乙醚蒸到提取管內(nèi)，待乙醚液面達(dá)到虹吸管的最高處以前，取下提取管。
四、稱重和計(jì)算
將提取瓶中的乙醚全部蒸干，洗凈外壁，置于105℃烘箱干燥至恒重，按下式計(jì)算樣品的促脂肪百分含量。
脂肪（﹪）=( W1-W0)/W×100
W1：接受瓶和脂肪重量（克）。
W：樣品重量（克）。
W0：接受瓶重量（克）。
五、注意事項(xiàng)
(1)樣品應(yīng)干燥后研細(xì)，裝樣品的濾紙筒一定要緊密，不能往外漏樣品，否則重做。
(2)放入濾紙筒的高度不能超過(guò)回流彎管，否則乙醚不易穿透樣品，脂肪不能全部提出，造成誤差。
(3)碰到含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水處理，等其干燥后聯(lián)通濾紙一起放入提取器內(nèi)。
(4)提取時(shí)水浴溫度不能過(guò)高，一般使乙醚剛開(kāi)始沸騰即可（約45℃左右）�；亓魉俣纫悦�8-12次／時(shí)為宜。
(5)所用乙醚必須是無(wú)水乙醚，如含有水分則可能將樣品中的糖以及無(wú)機(jī)物抽出，造成誤差。
(6)用于樣品測(cè)定脂肪，可按下式計(jì)算原來(lái)樣品脂肪的含量．
脂肪（﹪）=( W1-W0)/W*(100-A)
脂肪(％)=物的耐鹽性得到不同程度提高。其中Zhang和Blumwald(2001)、Zhang等(2001)報(bào)告的轉(zhuǎn)AtNHX1基因番茄可耐200mmol/L的氯化鈉,并把吸收的鈉鹽積累在葉片中,而果實(shí)的品質(zhì)不受影響。這些研究預(yù)示著在提高植物耐鹽性方面,離子的選擇吸收和跨膜運(yùn)輸?shù)幕蚬こ淌侵参锬望}性種質(zhì)改良的有效途徑。
A-100克樣品水分的含量(克)．
(7)冷凝管上端最好連接一個(gè)氯化鈣干燥管，這樣不僅可以防止空氣中水分進(jìn)入，而且還可以避免乙醚揮發(fā)在空氣中，這樣可防止實(shí)驗(yàn)室微小環(huán)境空氣的污染。如無(wú)此裝置，塞一團(tuán)干脫脂棉球亦可。
(8)如果沒(méi)有無(wú)水乙醚可以自己制備，制備方法如下：在1000毫升乙醚中，加入無(wú)水石膏50克，振搖數(shù)次，靜置10小時(shí)以上蒸餾，收集35℃以下的餾液，即可應(yīng)用。
(9)將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時(shí)，瓶口向一側(cè)傾斜45℃放置使揮發(fā)物乙醚易與空氣形成對(duì)流，這樣干燥迅速。
(10)樣品及醚提出物在烘箱內(nèi)烘干時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)，因?yàn)橐恍┖懿伙柡偷闹舅�，容易在加熱過(guò)程中被氧化成不溶于乙醚的物質(zhì)；中等不飽和脂肪酸，受熱容易被氧化而增加重量．在沒(méi)有真空干燥箱的條件下，可以在100-105℃干燥1.5-3小時(shí)。
(11)如果沒(méi)有乙醚或無(wú)水乙醚時(shí)，可以用石油醚提取，石油醚沸點(diǎn)30-60℃為好。
(12)使用揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌用直接火加熱。應(yīng)用電熱套電水浴，電燈泡等．
方法(二) 酸水解法
一、原理：
樣品經(jīng)酸水解后用乙醚提取，除去溶劑即得游離及結(jié)合脂肪總量。
二、試劑與儀器：
1、鹽酸
2、95％乙醇
3、乙醚
4、石油醚
5、100毫升具塞刻度量筒
三、操作方法：
1、樣品處理
(1)固體樣品：精密稱取約2克水，混勻后再加重。毫升鹽酸。置于50毫升大試管內(nèi)，加8毫升
(2)液體樣品：稱取10.0克，置于50毫升大試管內(nèi)，加工0毫升鹽酸，
2、將試管放70-80℃水浴中，每隔5-10分鐘以玻璃棒攪拌一次，至樣品消化完全為止，約40-50分鐘。
3、取出試管，加人10毫升乙醇，混合。冷卻后將混合物移于100毫升具塞量筒中，以25毫升乙醚分次洗試管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振搖1分鐘，小心開(kāi)塞，放出氣體，再塞好。靜置12分鐘，小心開(kāi)塞，并用石油醚-乙醚等量混合液沖洗塞及筒口附著的脂肪。靜置10-20分鐘，待上部液體清晰，吸出上清液于已恒重的錐形瓶?jī)?nèi)，再加5毫升乙醚于具塞量筒內(nèi)，振搖，靜置后，仍將上層乙醚吸出，放入原錐形瓶?jī)?nèi)。將錐形瓶置水浴上蒸干，置95-105℃烘箱中干燥2小時(shí)，取出放入干燥器內(nèi)冷卻0.5小時(shí)后稱重。
計(jì)算：
X=(m1-m0)/m2
X：樣品中脂肪的含量％；
m1：接受瓶與脂肪的質(zhì)量，g；
m2：接受瓶的質(zhì)量，g。
