葉綠素儀與浸提法測(cè)定玉米葉綠素含量的比較
葉綠素儀與浸提法測(cè)定玉米葉綠素含量的比較
對(duì)葉綠素的研究一直是人們極其關(guān)注的課題。葉綠素含量測(cè)定方法主要有分光光度法和活體葉綠素儀法兩大類(lèi),后來(lái)又發(fā)展了光聲光譜法。但是,用手持葉綠素儀或光譜分析儀測(cè)得的是色素相對(duì)含量指標(biāo),并且不同種類(lèi)植物葉片中的色素指標(biāo)與實(shí)際葉綠素含量之間的關(guān)系方程式不同,即不能用一種關(guān)系來(lái)轉(zhuǎn)換不同植物的色素含量。在日常實(shí)驗(yàn)中普遍采用分光光度法,用的較多的是Arnon法。Arnon法需要把植物材料研磨,經(jīng)過(guò)過(guò)濾或離心長(zhǎng),在操除渣、移液、定容、比色等過(guò)程,工作量大,提取時(shí)間作過(guò)程中誤差較大,且易受光氧化的破壞,不適于對(duì)田間大量樣品的測(cè)定和大量葉綠素的提取,并且也不適合大批量樣本的應(yīng)急檢測(cè)。后來(lái)又提出了丙酮乙醇混合液浸提法,證明利用混合液進(jìn)行葉綠素浸提的可行性。進(jìn)一步研究后發(fā)現(xiàn),混合液法比傳統(tǒng)Arnon法提取葉綠素效率高,穩(wěn)定性好。
選材：剪取葉片,洗凈后棄除葉柄和中脈,然后用紗布或吸水紙將葉片表面的水分吸干。為了試驗(yàn)的精確度更高,我們?cè)谌訒r(shí)僅取每片葉的中間部位,并用SPAD-502測(cè)定其葉綠素相對(duì)含量值,使其偏差保持在(-5,+5)之間,超出范圍者棄掉。把挑選的葉片剪成小于2mm碎條,混勻。分兩份,一份在室溫(25℃)下,立即用研磨法(80%丙酮,95%乙醇)和直接浸提法(8種提取液)提取葉綠素;另一份每次用千分之一天平精準(zhǔn)稱(chēng)取(200 mg,稱(chēng)取24份;1 g,稱(chēng)取6份),分別裝袋,密封好,儲(chǔ)放到冰箱中備用。為增加不同測(cè)定方法之間可比性,樣品在冷凍前稱(chēng)量分裝好。
浸提法:分別于容量瓶中加入15mL提取液,把葉片剪成寬度小于2mm的細(xì)絲或小塊,混勻,分別準(zhǔn)確稱(chēng)取200mg放入盛有提取液的容量瓶中,封口,置于黑暗條件下直接浸提。研磨法每個(gè)處理重復(fù)3次。室溫試驗(yàn)時(shí),按8種提取液分8組,每組12個(gè)50mL的容量瓶,分別按照上述方法加入葉片和各浸提液,并計(jì)時(shí),在室溫黑暗條件下直接浸提葉綠素,并不時(shí)搖動(dòng)。分別于10h、13h、16h和48h時(shí),每組各取出3個(gè)容量瓶,定容至50mL后在645nm和663nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。取出冷凍20h的葉片按照如上方法和程序或研磨或浸提。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù),浸提在50℃水浴中進(jìn)行,用肉眼觀察葉組織完全變白,即說(shuō)明浸提完全,取出冷卻后定容,在645 nm和663 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。
葉綠素儀：現(xiàn)在市面上最流行的莫過(guò)于SPAD502。SPAD502是有日本柯尼卡美能達(dá)研制生產(chǎn)的，SPAD502通過(guò)測(cè)量葉子對(duì)兩個(gè)波長(zhǎng)段里的吸收率，來(lái)評(píng)估當(dāng)前葉子中的葉綠素的相對(duì)含量。該儀器擁有小巧的機(jī)身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋并帶到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)量，因此又叫做手持葉綠素儀。葉綠素儀操作也非常方便，你只需將葉片插入并合上測(cè)量探頭即可，無(wú)需將葉片剪下，這樣就可以在作物的生長(zhǎng)過(guò)程中全程對(duì)特定的葉片進(jìn)行監(jiān)測(cè)，從而得到更科學(xué)的分析結(jié)果。因此，葉綠素能夠?qū)θ~片進(jìn)行無(wú)損測(cè)定，保護(hù)了葉片本身。
這兩種方法各有優(yōu)勢(shì)，浸提法提取時(shí)受很多試劑的影響，因此在使用試劑時(shí)一定要謹(jǐn)慎，另外，浸提法測(cè)定時(shí)如果采用冷凍處理，可以縮短浸提時(shí)間，但是其測(cè)定值會(huì)變低。而用SPAD502測(cè)定則操作簡(jiǎn)單，結(jié)果精確，但是該儀器價(jià)格昂貴。因此我們要根據(jù)實(shí)際需求，來(lái)選擇測(cè)定方法。
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