幾種葉綠素含量測(cè)定方法比較
幾種葉綠素含量測(cè)定方法比較
葉綠素含量是植物生長過程中一個(gè)重要的生理指標(biāo),由于其對(duì)周圍環(huán)境很敏感,并與植物的光合作用、營養(yǎng)吸收等密切相關(guān),被廣泛作為植物生長的常規(guī)測(cè)定指標(biāo)項(xiàng)目。葉綠素含量的測(cè)定方法有多種,在國際上以傳統(tǒng)的Arnon法(也稱研磨法)應(yīng)用最為廣泛。但該法需要把植物材料研磨并經(jīng)轉(zhuǎn)移、過濾或離心處理,不僅工作量大,而且不可避免地使試驗(yàn)人員較長時(shí)間與揮發(fā)于空氣中的試劑相接觸,對(duì)人體損害較大。近年來,直接浸取法受到重視,張憲政等用不同配比的混合液對(duì)葉綠素進(jìn)行提取,證明了用混合液提取的可行性。李得孝,吳志旭等對(duì)傳統(tǒng)的Arnon法進(jìn)行了改進(jìn),將樣品冷凍處理后,用50℃丙酮靜置提取并進(jìn)行測(cè)定,極大提高了工作效率。
(1)研磨法。稱取0. 5 g樣品于研缽內(nèi),加入少量CaCO3和5 mL 80%的丙酮,將材料充分研磨細(xì)碎直至變白(約5 min),轉(zhuǎn)移至10 mL具塞離心管中,定容至刻度,搖勻后置于4℃冰箱中靜置12 h,離心10 min (2000 r/min),取上清液測(cè)定。(2)直接浸取法。稱取0. 5 g樣品放入10 mL具塞離心管中,用80%丙酮定容至刻度,于暗柜中靜置72 h浸取,取上清液測(cè)定。(3)樣品冷凍后用50℃提取液提取法。稱取0. 5 g樣品于10 mL具塞離心管中,置冰箱中冷凍2h,取出后加入10mL在水浴鍋中加熱至50℃的80%丙酮,充分振搖后于暗柜中靜置4h,取上清液測(cè)定。（4）葉綠素計(jì)法：葉綠素計(jì)是所有方法中最快捷的，你只需手持葉綠素計(jì)，將葉片插入儀器的感應(yīng)部位，然后合上測(cè)量探頭即可。應(yīng)用于這種測(cè)定的儀器又被叫做便攜式葉綠素儀，因?yàn)樵撊~綠素計(jì)擁有小巧的機(jī)身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋并帶到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)量。
在以上幾種測(cè)定方法中，直接浸取法提取效果最好,但耗時(shí)長,傳統(tǒng)研磨法葉綠素的損失較大,冷凍后用50℃提取液提取法操作簡(jiǎn)便且提取速度較快,在提取率和穩(wěn)定性方面均顯示良好的優(yōu)越性。冷凍后用50℃提取液提取法的最優(yōu)試驗(yàn)條件為將試驗(yàn)材料冷凍1 h后,靜置提取3 h。而葉綠素儀法，則相較于其他三種化學(xué)方法，更加快速方便。而且用SPAD-502測(cè)定葉綠素含量時(shí)，不會(huì)對(duì)葉片造成損傷，這也是使用葉綠素計(jì)的另一大好處。因?yàn)槟悴恍枰氯~片，直接用儀器夾住葉片測(cè)定即可，這樣就可以在作物的生長過程中全程對(duì)特定的葉片進(jìn)行監(jiān)測(cè)，從而得到更科學(xué)的分析結(jié)果。
