葉綠素含量與廣玉蘭葉片黃化的關(guān)系
來源： http://m.tjspmx.com.cn/ 類別：實(shí)用技術(shù) 更新時間：2013-02-01 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網(wǎng)提供】 廣玉蘭葉片黃化一般先從嫩梢上的幼葉先失綠，表現(xiàn)出病癥；然后由上向下、由葉緣向葉基擴(kuò)展，后逐漸擴(kuò)展到葉肉組織，葉脈仍保持綠色；接著葉脈也失綠，導(dǎo)致整片葉變?yōu)槿辄S色至乳白色；嚴(yán)重時，葉緣焦枯，乃至全葉干枯、脫落。其主要病因是由于缺鐵造成的。經(jīng)過葉綠素含量測定儀的驗(yàn)證，缺鐵將會造成葉綠素的含量降低，然后致使黃化病，廣玉蘭感染黃化病會嚴(yán)重影響園林景觀效果，并可造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。
以鄭州市綠化栽植的生長發(fā)育程度一致但黃化程度不同的10a生的廣玉蘭為材料，對黃化癥狀進(jìn)行分級。具體標(biāo)準(zhǔn)為：0級：樹體葉片顏色正常，沒有黃化葉片，長勢良好；Ⅰ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例不到整株葉片的1/4；Ⅱ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的1/4、但少于1/2；Ⅲ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的1/2、但少于3/4；Ⅳ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的3/4，直到樹體發(fā)黃，確定為4級。用清水清洗各個級別的葉片，然后再用純凈水清洗一遍，置于通風(fēng)處晾干，將其分別裝入自封袋內(nèi)備用。依次檢測其葉綠素含量及POD、SOD活性和MDA(丙二醛)濃度。①綠素含量。不同級別葉片葉綠素含量測定方法參考李合生主編的植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)。②POD檢測。過氧化物酶活性的測定參考孫群、胡景江主編的植物生理學(xué)研究技術(shù)。③SOD檢測。超氧化物歧化酶的測定采用氮藍(lán)四唑(NBT)法測定。④MDA檢測。稱取剪碎的材料0.5g，加入1mL10%的TCA和少量石英沙，研磨至勻漿，再加入4mLTCA進(jìn)一步研磨，勻漿，在3000r•min－1下離心10min，吸取離心的上清液2mL(對照加入2mLTCA)，加入0.67%的TB溶液2mL，混合后將混合物置于沸水浴中反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。取上清液測定在450nm、532nm和600nm波長下的吸光度，并按以下公式計(jì)算出MDA濃度。
葉綠素含量與葉片黃化的面積有直接關(guān)系，隨著葉片失綠、黃化程度的加重，葉綠素a與葉綠素b含量均明顯降低。葉綠素a含量由正常葉片的0.21mg•L－1逐級降至0.03mg•L－1，葉綠素b含量由正常葉片的0.08mg•L－1逐級降至0.01mg•L－1；Ⅳ級黃化葉片中葉綠素a的含量較正常葉片的含量降低了86.0%，葉綠素b的含量降低了87.5%。葉綠素a與葉綠素b的比值隨著葉片黃化程度的加重而增大，這說明葉片黃化對葉綠素b含量的影響要大于對葉綠素a含量的影響。分析原因，在外界環(huán)境的影響下，葉綠素b較葉綠素a更容易降解。葉綠素含量的降低直接影響植物的光合作用及其效率，并使類胡蘿卜素含量增大，最終導(dǎo)致葉片變黃。
隨著黃化程度的加重，SOD、POD的活性均呈下降趨勢，分別由正常葉片的1.04降至0.47和1.00降至0.65；0級、Ⅰ級的酶活性變化不明顯，而Ⅱ級到Ⅳ級的酶活性變化比較顯著。SOD、POD的活性減低嚴(yán)重影響了正常代謝過程。MDA的濃度則呈上升狀態(tài)，從0.44升至1.00，0級、Ⅰ級的濃度變化不明顯，而Ⅱ級到Ⅳ級的變化比較顯著。丙二醛是植物體內(nèi)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及關(guān)鍵酶活性，最終使蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子發(fā)生交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。因此，隨著植物體內(nèi)丙二醛含量的增高，這種作用就會越加嚴(yán)重，從而使葉片細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能受到破壞，蛋白氧化變性、酶活性明顯降低。
隨著葉片失綠、黃化程度的加重，葉綠素a與葉綠素b含量均明顯降低。葉綠素a含量由正常葉片的0.21mg•L－1逐級降至0.03mg•L－1，葉綠素b含量由正常葉片的0.08mg•L－1逐級降至0.01mg•L－1；Ⅳ級黃化葉片中葉綠素a的含量較正常葉片的含量降低了86.0%，葉綠素b的含量降低了87.5%。葉綠素a與葉綠素b的比值隨著葉片黃化程度的加重而增大，葉片黃化對葉綠素b含量的影響要大于對葉綠素a含量的影響。葉綠素含量的降低直接影響植物的光合作用及其效率，并使類胡蘿卜素含量增大，最終導(dǎo)致葉片變黃。SOD、POD的活性均呈下降趨勢，分別由正常葉片的1.04降至0.47和1.00降至0.65；植物在逆境條件下體內(nèi)出現(xiàn)的傷害以及植物對逆境的不同抵抗能力與體內(nèi)的SOD、POD活性有關(guān)，這些酶具有清除自由基的能力，可以減輕膜脂過氧化程度，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。而如何增強(qiáng)SOD、POD的活性是防治廣玉蘭黃化病的關(guān)鍵問題，需要做進(jìn)一步的研究。
MDA的濃度則呈上升狀態(tài)，從0.44升至1.00，影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及關(guān)鍵酶活性，最終使蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子發(fā)生交聯(lián)聚合，使其失去正常生理機(jī)能，影響了廣玉蘭的生長。文章中使用的葉綠素含量測定儀由浙江托普儀器有限公司提供，推薦同類儀器：粗脂肪測定儀。
以鄭州市綠化栽植的生長發(fā)育程度一致但黃化程度不同的10a生的廣玉蘭為材料，對黃化癥狀進(jìn)行分級。具體標(biāo)準(zhǔn)為：0級：樹體葉片顏色正常，沒有黃化葉片，長勢良好；Ⅰ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例不到整株葉片的1/4；Ⅱ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的1/4、但少于1/2；Ⅲ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的1/2、但少于3/4；Ⅳ級：樹體出現(xiàn)黃化葉片，比例多于整株葉片的3/4，直到樹體發(fā)黃，確定為4級。用清水清洗各個級別的葉片，然后再用純凈水清洗一遍，置于通風(fēng)處晾干，將其分別裝入自封袋內(nèi)備用。依次檢測其葉綠素含量及POD、SOD活性和MDA(丙二醛)濃度。①綠素含量。不同級別葉片葉綠素含量測定方法參考李合生主編的植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)。②POD檢測。過氧化物酶活性的測定參考孫群、胡景江主編的植物生理學(xué)研究技術(shù)。③SOD檢測。超氧化物歧化酶的測定采用氮藍(lán)四唑(NBT)法測定。④MDA檢測。稱取剪碎的材料0.5g，加入1mL10%的TCA和少量石英沙，研磨至勻漿，再加入4mLTCA進(jìn)一步研磨，勻漿，在3000r•min－1下離心10min，吸取離心的上清液2mL(對照加入2mLTCA)，加入0.67%的TB溶液2mL，混合后將混合物置于沸水浴中反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。取上清液測定在450nm、532nm和600nm波長下的吸光度，并按以下公式計(jì)算出MDA濃度。
葉綠素含量與葉片黃化的面積有直接關(guān)系，隨著葉片失綠、黃化程度的加重，葉綠素a與葉綠素b含量均明顯降低。葉綠素a含量由正常葉片的0.21mg•L－1逐級降至0.03mg•L－1，葉綠素b含量由正常葉片的0.08mg•L－1逐級降至0.01mg•L－1；Ⅳ級黃化葉片中葉綠素a的含量較正常葉片的含量降低了86.0%，葉綠素b的含量降低了87.5%。葉綠素a與葉綠素b的比值隨著葉片黃化程度的加重而增大，這說明葉片黃化對葉綠素b含量的影響要大于對葉綠素a含量的影響。分析原因，在外界環(huán)境的影響下，葉綠素b較葉綠素a更容易降解。葉綠素含量的降低直接影響植物的光合作用及其效率，并使類胡蘿卜素含量增大，最終導(dǎo)致葉片變黃。
隨著黃化程度的加重，SOD、POD的活性均呈下降趨勢，分別由正常葉片的1.04降至0.47和1.00降至0.65；0級、Ⅰ級的酶活性變化不明顯，而Ⅱ級到Ⅳ級的酶活性變化比較顯著。SOD、POD的活性減低嚴(yán)重影響了正常代謝過程。MDA的濃度則呈上升狀態(tài)，從0.44升至1.00，0級、Ⅰ級的濃度變化不明顯，而Ⅱ級到Ⅳ級的變化比較顯著。丙二醛是植物體內(nèi)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及關(guān)鍵酶活性，最終使蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子發(fā)生交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。因此，隨著植物體內(nèi)丙二醛含量的增高，這種作用就會越加嚴(yán)重，從而使葉片細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能受到破壞，蛋白氧化變性、酶活性明顯降低。
隨著葉片失綠、黃化程度的加重，葉綠素a與葉綠素b含量均明顯降低。葉綠素a含量由正常葉片的0.21mg•L－1逐級降至0.03mg•L－1，葉綠素b含量由正常葉片的0.08mg•L－1逐級降至0.01mg•L－1；Ⅳ級黃化葉片中葉綠素a的含量較正常葉片的含量降低了86.0%，葉綠素b的含量降低了87.5%。葉綠素a與葉綠素b的比值隨著葉片黃化程度的加重而增大，葉片黃化對葉綠素b含量的影響要大于對葉綠素a含量的影響。葉綠素含量的降低直接影響植物的光合作用及其效率，并使類胡蘿卜素含量增大，最終導(dǎo)致葉片變黃。SOD、POD的活性均呈下降趨勢，分別由正常葉片的1.04降至0.47和1.00降至0.65；植物在逆境條件下體內(nèi)出現(xiàn)的傷害以及植物對逆境的不同抵抗能力與體內(nèi)的SOD、POD活性有關(guān)，這些酶具有清除自由基的能力，可以減輕膜脂過氧化程度，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。而如何增強(qiáng)SOD、POD的活性是防治廣玉蘭黃化病的關(guān)鍵問題，需要做進(jìn)一步的研究。
MDA的濃度則呈上升狀態(tài)，從0.44升至1.00，影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及關(guān)鍵酶活性，最終使蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子發(fā)生交聯(lián)聚合，使其失去正常生理機(jī)能，影響了廣玉蘭的生長。文章中使用的葉綠素含量測定儀由浙江托普儀器有限公司提供，推薦同類儀器：粗脂肪測定儀。
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